Nestet polymerasekjedereaksjon

Den nestede polymerasekjedereaksjonen  ( nestet PCR), også kalt nestet PCR , er en modifisering av den klassiske PCR for å redusere mengden av uspesifikke produkter som skyldes binding av primere til uventede steder.

Selve polymerasekjedereaksjonen er en prosess som amplifiserer DNA- sekvenser ved bruk av en termoregulert DNA-polymerase . Produktet kan brukes til sekvensering eller analyse, og denne prosessen er hjørnesteinen i mange forsknings- og laboratorieapplikasjoner av genetikk, som rettsmedisinsk vitenskap eller DNA-fingeravtrykk. Konvensjonell PCR krever primere som er komplementære til endene av DNA-målet. Binding av primere til feil steder er et tilbakevendende problem som resulterer i amplifisering av uventede sekvenser.

Dermed gjør den nestede PCR det mulig, ved involvering av to par primere som brukes suksessivt, å begrense dette fenomenet, idet det andre paret av primere antas å forsterke en sekvens lokalisert i produktet av den første PCR.

Fremgangsmåte

  1. DNA-målet gjennomgår den første PCR med et første par primere (i grønt i diagrammet). Blant de forskjellige oppnådde PCR-produktene inneholder bare den forventede sekvensen.
  2. Produktet fra den første reaksjonen gjennomgår en annen PCR med et andre par primere, her i rødt. Det er svært usannsynlig at det opprinnelig uønskede produktet vil inneholde bindingsstedene for dette andre paret av primere, noe som sikrer at produktet fra den andre PCR er svært lite forurenset med uønsket produkt av primerdimerer, strukturer i hårnål eller alternativ målsekvens.

Eksterne linker