Optisk klemme

Den optiske klemmen er et optisk verktøy introdusert i 1987 og brukt i laboratoriet som tillater fangst og manipulering av mål som celler , organeller eller partikler . Den bruker kraften som følge av brytningen av en laserstråle i et gjennomsiktig medium, for fysisk å holde og flytte mikroskopiske dielektriske gjenstander . Flere optiske pinsetter kan til og med brukes til å manipulere flere mål samtidig.

Den optiske klemmen har mange anvendelser innen biologi, hovedsakelig der den tillater ikke-destruktiv manipulasjon, men også i kjemi og fysikk .


Historisk

Dette er det XVII -  tallet at tyske Johannes Kepler (1572 Weil der Stadt Regensburg-1630) la merke til de første effektene av lys på partiklene. Han utledes at et trykk ble utøvd av solen på partikler som rømte fra en komet som beveget seg i retning motsatt av stjernen.

I 1873 beviste skotten James Clerk Maxwell (Edinburgh 1831–1879) teoretisk at lys er i stand til å utøve en kraft på materie (bedre kjent som strålingstrykk eller lysstyrke). Seksti år senere avviser østerrikeren Otto Robert Frish (Wien 1904 - 1979) en stråle av natriumatomer ved å bombardere den med lys fra en natriumlampe.

Begrepet optisk griper dukket ikke opp før i 1986, under pennen til Arthur Ashkin, som deretter jobbet for "  Bell Laboratories  ". Det lykkes med å akselerere gjennomsiktige latexmikrosfærer nedsenket i vann ved hjelp av en enkelt laserstråle. I 1987 klarte han å fange levende biologiske gjenstander fremdeles med en enkelt stråle.

Generelt prinsipp for den optiske klemmen

Prinsippet med den optiske klemmen er å fange et lite objekt ( molekyl , celle, etc.) ved hjelp av en laserstråle . En presis forskyvning av dette objektet tillates da ved enkel forskyvning av fangstraseren. Fysisk fellen av den optiske griperen er avhengig av en balanse mellom den kraft som skyldes intensiteten gradienten av den fokuserte laser og trykk-kraften av stråling som utøves av spredning av lys på gjenstanden.

Fysisk beskrivelse

Involverte krefter

Tre fenomener muliggjør manipulering av et objekt med lys: refraksjon, strålingstrykk og virkningen av det elektriske feltet til laserstrålen på målet. Noen av disse kreftene avhenger av størrelsen på partikkelen som skal fanges. Vi vil skille Mie-spredningsregimet (med en partikkel av størrelse som kan sammenlignes med bølgelengden) fra Rayleigh-spredningsregimet (partikkelstørrelse mye mindre enn bølgelengden).

Brytning

For å skape en felle i de tre dimensjonene, må målet være gjennomsiktig, slik at det kan være fenomenet brytning: når lyset passerer fra ett medium til et annet med en annen indeks, blir det avbøyd i henhold til loven av Snell-Descartes. Når den passerer gjennom en liten, gjennomsiktig perle, brytes den når den kommer inn og ut. Dette endrer retningen for forplantning av lys, og derfor er retningen for fotonisk momentum, som husker, E / c hvor E er energien til fotonet og c lysets hastighet i vakuum. Etter handlings- og reaksjonsprinsippet som også kalles Newtons tredje lov: "ethvert legeme A som utøver en kraft på et legeme B gjennomgår en kraft med lik intensitet, men i motsatt retning, utøvd av kroppen B", endres også målets momentum . A er målet og B strålen, og kraften som utøves fra A på B endrer retning av momentet til strålen på grunn av lysbrekk. Så det utøves en kraft på ballen som er lik forskjellen mellom retning av momentet til strålen ved inngangen til målet og retning av momentet til strålen ved utgangen. Når målet således er plassert i en intensitetsgradient, idet momentet er større på den ene siden enn den andre, på grunn av det større antall fotoner som ser dets modifiserte momentum, vil cellen ha en tendens til å bevege seg mot feltet med høyere intensitet.

Strålen sendes gjennom objektivet, som er en konvergerende linse med høy numerisk blenderåpning. Børsten fokuseres deretter i observasjonsplanet til mikroskopet. Det blir en kjegle. Når den treffer målet, vil den bevege seg mot det sterkeste feltet som er sentrum av bjelken. Da er det børstens kjegleform som fører målet mot sentrum av fellen. Faktisk er hellingen slik at brytningen alltid vil gi en retning av momentum retning mot sentrum av fellen! Ettersom målet alltid trekkes mot sentrum av fellen, hvis vi beveger fellen, beveger vi målet med det.

Det elektriske feltet

Partikkelen som skal fanges er dielektrisk, den oppfører seg som en dipol og Lorentz-kraften påføres den. I tilfelle av modellen Rayleigh , kan partikkel bli assimilert til et punkt, og den elektriske felt som gjelder er konstant: .

I denne formelen angir intensiteten til laseren i posisjonen hvor partikkelen er lokalisert, størrelsen på partikkelen, indeksen til mediet der partikkelen er lokalisert, forholdet mellom indeksen til partikkelen og indeksen for omgivelsene.

Denne kraften er attraktiv, og den er desto sterkere jo nærmere partikkelen er sentrum av laserstrålen.

Strålingstrykk

På grunn av den refleksjon som oppstår ved grenseflaten mellom partikkelen og mediet (forskjellige indekser), blir en brytningskraft som skapes, uttrykk: .


Strålingstrykket avhenger av lysintensiteten som brukes på målet (lineær variasjon) samt bølgelengden til laseren som brukes i .


Fotoner utøver også aksialt trykk på målet. Faktisk brytes ikke alle fotonene, noen reflekteres. Ved å reflektere over målveggen, vil de gi opp noe av momentum. Denne kraften vil drive målet i retning av forplantning av lyset: det er strålingstrykket. Det er der vi merker interessen til ekspanderen og en linse med høy numerisk blenderåpning for å fokusere strålen på klemmen. Faktisk, slik at målet ikke rømmer på grunn av dette strålingstrykket, må de bryte strålene generere en større kraft bakover enn strålingstrykket. Imidlertid, jo mer de perifere strålene som kommer fram til målet, desto større er denne kraften. Strålene som er mest tilbøyelige til målet, vil være de lengst fra midten av det. Det er derfor nødvendig med en bred laserstråle, en børste. I tillegg, jo større den numeriske blenderåpningen på linsen er, desto mer vil strålene vippes.

Eksperimentelt oppsett

Eksperimentelle forhold

Opprettelsen av en felle krever flere trinn: først og fremst valget av mediet der målet er plassert, det for laseren i henhold til målet, valget av optiske enheter for å lage fellen på ønsket sted.

Valg av medium

For at den optiske brytningskraften på målet skal eksistere, er det nødvendig å pålegge en begrensning på indeksen til mediet som målet vil utvikle seg i. Enten brytningsindeksen til mediet og det målet som skal fanges. Enten vinkelen mellom det normale og planet for separasjon av mediet og målet og den innfallende strålen og vinkelen mellom denne normale og den reflekterte strålen.

Ved hjelp av Snell-Descartes' lov , for den , er det nødvendig .

Valget av laser

Når det gjelder en konvensjonell optisk klemme, må laseren brukes kontinuerlig, med en effekt som spenner fra noen få mW til noen titalls mW for en felle. Laseren må ikke være for kraftig med risiko for delvis å ødelegge eller fullstendig ødelegge målet (dette kalles optisk skade eller optikk). Skaden på målet av laseren avhenger av absorpsjonen av målet ved laserens bølgelengde . Laseren bør velges i et område med lav absorpsjon av målet.

Konvensjonell optisk klemme

Den konvensjonelle optiske klemmen bruker en laserkilde ( bølgelengde avhenger av anvendelse, men det er ofte funnet i den nær infrarøde for biologiske og tekniske anvendelser for å minimalisere absorpsjonen fra mediet) og en stor mikroskop objektiv. Åpning . Blenderåpningen (f / 1.2 eller bedre) har en rolle i størrelsen på fellen på grunn av diffraksjonsgrensen .

Vi legger ofte til et separatorblad og et kamera for å visualisere manipulasjonen.

En variant bruker den romlige modulasjonen av strålen for å tillate rotasjon av partiklene som studeres gjennom interferens av to moduser av laseren.

Flere optiske klemmer

For å fange opp flere partikler samtidig, er flere tilnærminger mulige: multiplikasjon av kildene, tidsmessig skanning ved bruk av en enkel optisk klemme eller generering av flere bjelker ved diffraksjon (man snakker da om en holografisk klemme.

applikasjoner

Biologiske applikasjoner

Interessen for optiske pinsetter for biologi ligger i den ikke-invasive naturen til metoden. Dermed forstyrrer ikke operatøren forholdene i eksperimentet. Det er således mulig å manipulere organeller inne i en celle uten å perforere membranen.

Cellemanipulasjon

Bruk av optisk pinsett muliggjør presis manipulering av mange encellede organismer, inkludert bakterier , virus og humane celler . Mye forskning på intercellulære kontakter har blitt utført ved hjelp av optisk pinsett.

Elastisitetsmåling

En av pionerene innen forskning på optisk pinsett, Steven Chu, var interessert i de elastiske egenskapene til DNA-molekylet. Han og teamet hans festet en mikroperle i hver ende av molekylet. Så, enten ved å fange hver av dem, eller ved å feste den ene til dekkglasset, og fange den andre, strakte de molekylet. Deretter frigjør de en av de to mikroperlene og studerer retur til resten av molekylet. Dermed validerte de teorier om fysikken til polymerer når de er langt fra likevekt.

Kraftmåling

Menneskekroppen har motorceller, som sædceller, som bruker mekanisk kraft til å bevege seg. Vi kan enkelt måle forskyvningskreftene deres ved å fange dem, og deretter gradvis redusere fellenes kraft, noterer vi verdien sædet slapp. Det tilsvarer deretter flagellær fremdriftskraft i gameten. Kroppen har også motoriske proteiner, som kinesin eller myosin . Den bruker en kompleks kjemisk mekanisme for å bevege seg langs mikrotubuli: den har to kulemotorer som vekselvis er festet til mikrotubuli. Mellom de to vedleggene, genererer en kjemisk reaksjon en kraft som roterer kinesin. Forskyvningen av sistnevnte på mikrotubuli er i form av "trinn". Denne andre mekanismen brukes til transport av organeller og vesikler i selve cellen. Målet er å måle den kjemiske kraften som får kinesin til å rotere. Et kinesinprotein er festet til en mikroperle fanget av en optisk klemme som er avsatt på en mikrorør. Proteinet begynner deretter å utvikle seg og tar ballen med seg. Forskyvningen av ballen i forhold til sentrum av fellen er proporsjonal med kraften som kinesin utøver for å komme videre. En lav stivhetsklemme (≈ 0,02 pN / nm) brukes når man vil måle den elementære forskyvningen av kinesin. Maksimal kraft måles ved hjelp av en mer stiv optisk klemme. Dermed ble det funnet at den maksimale kraften utviklet av dette motorproteinet er mellom 5 og 7 pico Newton.


Bruken av optisk pinsett har også gjort det mulig å måle styrken av RNA- polymerase så vel som for myosin.

Ikke-biologiske applikasjoner

Produksjon av nano-motorer

Se også

Eksterne linker

Relaterte artikler

Merknader og referanser

  1. (no) [1] , Historie om optisk fangst og manipulering av små nøytrale partikler, atomer og molekyler - A. Ashkin - IEEE - 2000
  2. [2] , Den optiske pinsetten - Jean-Pierre Galaup, Centre d'Orsay - Teknisk notatbok 'Photonic' nummer 66
  3. [3] , Avhandling: Fangst og manipulering av biologiske objekter av optiske bølgeledere - Guillaume Colas - 2006
  4. (en) Direkte måling av kolloidale interaksjoner med holografiske optiske pinsetter - Marco Polin - 2007Google Bøker
  5. Nano-optikk fra det faste stoffet (EGEM-traktaten, optoelektronisk serie - B. Jacquier)Google Bøker
  6. [4] , Avhandling: Elastisitet i menneskelige røde blodlegemer, en studie av optisk pinsett - G. Lenormand - 2001, side 54 til 66
  7. [5] , The Optical Clamp - G. Dantelle
  8. Nano-optics of the solid (EGEM-traktaten, optoelektronisk serie - B. Jacquier)Google Bøker
  9. [6] , TD Optical pinsett, University of the Mediterranean
  10. [7] , Avhandling: Optisk pinsett for en taktil følelse av mikromanipulering - Cécile Pacoret, side 48
  11. (in) [8] , Optisk pinsett: neste generasjon - Kishan Dholakia, Gabriel Spalding og Michael MacDonald - 2002
  12. Nano-optics of the solid (EGEM-traktaten, optoelektronisk serie) - B. JacquierGoogle Books
  13. (in) [9] , micromanipulation of Retinal Neurons by Optical Tweezers - E. Townes-Anderson, RS St. Jules, DM Sherry J. Lichtenberger and Mr Hassanain - Molecular Vision - 1998
  14. (no) [10] , Bruk av elektriske og optiske pinsetter for å lette studier av molekylære motorer - Mark E. Arsenault, Yujie Sun, Haim H. Baua og Yale E. Goldman - 2008
  15. [11] , Medical / Science Technical File number 19, 2003, 'Optisk pinsett i biologi og medisin'