Den globulin er et antistoff rettet mot et immunoglobulin . Brukt i laboratoriet som et reagens, gjør det mulig å demonstrere et antistoff . Analysen som tillot denne demonstrasjonen, opprinnelig kalt " Coombs-reaksjon ", kalles nå "antiglobulintest".
Denne testen ble utviklet av Robin Coombs , Arthur Mourant og Rob Race.
Antiglobulin oppnås ved å immunisere et dyr, for eksempel en kanin, med humant serum. Dette humane serumet inneholder immunglobuliner . For dyret er disse immunglobulinene antigene, og denne kaninen vil syntetisere anti- "humant immunglobulin" kaninantistoffer, noe som gjør det mulig å oppnå et anti- "humant immunglobulin" -serum fra kaninen, kalt AGH-serum eller humant antiglobulin. Dette antiglobulinet, av animalsk opprinnelse, binder seg derfor spesifikt til de isotypiske epitopene til humane immunglobuliner.
Denne testen gjorde det mulig, opprinnelig ved hjelp av en agglutinasjonsteknikk , å demonstrere tilstedeværelsen av humane immunglobuliner festet på erytrocyttene .
Denne teknikken brukes til spesifikt å gjenkjenne en klasse med immunglobuliner, IgG, IgA, IgM (i dette tilfellet et antiglobulin) eller fraksjoner av komplement , C4, C3b, C3c og C3d spesielt (det gjør det ikke. Det er da mer en antiglobulin streng sensu, men anti-komplement), i stand til å fikses på erytrocyttene. Vi bruker deretter enten en såkalt polyspesifikk AGH (anti-IgG + C3d) -for antistoff-screening, eller spesifikke antiglobuliner (anti-IgG, anti-IgA, anti-IgM), assosiert med anti-komplement (C3c og C3d) - for en diagnose av hemolytisk anemi, for eksempel.
Den direkte antiglobulintesten (i Frankrike TDA eller direkte Coombs-reaksjon -RCD, i Belgia: direkte Coombs), tidligere kalt direkte Coombs-reaksjon (RCD), som gjør det mulig å demonstrere tilstedeværelsen av antistoffer festet på erytrocytter. Denne testen brukes til å diagnostisere hemolytisk sykdom hos nyfødte , og til diagnostisering av autoimmune hemolytiske anemier , eller inkompatibilitet med transfusjon.
I disse tilfellene er erytrocyttene allerede dekket med humane antistoffer som ikke er tilstrekkelige alene til å forårsake agglutinasjon. Disse erytrocyttene kalles sensibiliserte røde blodlegemer (i Frankrike GRS). Disse røde blodcellene må "vaskes", det vil si frigjort fra plasmaet som omgir dem, og resuspenderes i en saltoppløsning som ikke inneholder flere ubundne antistoffer som vil nøytralisere antiglobulinet (dette vasketrinnet kan nå unngås ved en gelfiltreringsteknikk ). Tilsetningen av antiglobulin til disse sensibiliserte og "vasket" røde blodcellene forårsaker deretter agglutinasjon. Reaksjonen er da positiv. Denne testen brukes også til å sjekke om det har vært fiksering in vivo (i kroppen) av komplementet, som forårsaker hemolyse av de røde blodcellene, eller for å bestemme klassene (eller underklasser om nødvendig) av molekylene av immunglobuliner festet på de røde blodcellene som ble studert.
Denne testen må ofte suppleres med en elueringsteknikk , noen ganger mer følsom, som også gjør det mulig å demonstrere et antistoff festet på de røde blodcellene, spesielt for demonstrasjon av en ABO føtal-maternell inkompatibilitet, eller for nylig transfusjonskompatibilitet.
Den indirekte antiglobulintesten (i Frankrike TIA tidligere kalt "indirekte Coombs-reaksjon", -RCI, i Belgia indirekte Coombs) som gjør det mulig å demonstrere et uregelmessig ikke-agglutinerende antistoff i et serum eller et blodgruppe- antigen på erytrocytter.
I det første tilfellet er det et søk etter uregelmessig agglutinin (i Frankrike RAI ). Ved å samle et ukjent serum eller plasma og erytrocytter som bærer kjente antigener, kan de ønskede antistoffene festes på disse erytrocyttene og sensibilisere dem. I et andre trinn vil virkningen av antiglobulin tillate demonstrasjon av denne mulige sensibilisering. Hvis reaksjonen er positiv, skyldes det at antistoffer er fiksert på disse erytrocyttene, og derfor var til stede i serumet eller plasmaet som er gjenstand for testen for uregelmessig agglutinin.
Den samme testen brukes også til å utføre kryssmatchingstesten, som består i å teste pasientens serum eller plasma med en prøve av erytrocytter fra erytrocyttkonsentratet som skal transfuseres. Hvis reaksjonen er positiv, betyr det at det er et antistoff mot giverens blodceller, og at den planlagte transfusjonen er inkompatibel, uten å vite hvilket blodgruppesystem som er involvert. En annen blodenhet må derfor velges, og selvfølgelig testes.
I det andre tilfellet, samlingen av et kjent antistoff, er det da et testserum, med ukjente erytrocytter, tillater påvisning av det tilsvarende antigenet på disse erytrocyttene. Dette er bestemmelsen av en fenotyp i blodgruppen.
Siden da har denne testen blitt utbredt og gjør det mulig å demonstrere et humant immunglobulin i en hvilken som helst væske eller spesielt festet på hvilken som helst bærer. Enten ved teknikker som bruker sensibiliserte røde blodlegemer som en indikator, teknikker for inhibering eller forbruk av antiglobulin brukt til bestemmelse av Gm-, Km-, ISf-, Am-gruppene , eller av et merket antiglobulin, som gjør det mulig å oppdage dets tilstedeværelse, at er dens spesifikke binding til humane immunglobuliner.
Humane anti-D-antistoffer (antistoffet må være av menneskelig opprinnelse, må være ufullstendig, relativt hyppig for å være i stand til å oppnå maksimalt mulige epitoper på de forskjellige underklassene av IgG, for å gi en klar positiv reaksjon, knyttet til antall Berørte RH-nettsteder, med antiglobulin) til et individ i gruppe Gm: 1,17,21 er festet på røde blodlegemer Rh +, D. Vi har da sensibilisert røde blodlegemer, GRS, men som ikke er agglutinert, D er et ufullstendig antistoff. Vi lager et anti-Gm1 anti-globulin (antiglobulin av menneskelig opprinnelse) som virker på disse GRS. Vi forårsaker deretter agglutinasjon.
La oss blande et X-serum med dette anti Gm1 før vi får det til å virke på vår GRS. Hvis dette serumet X inneholder et immunglobulin fra gruppen Gm1, vil anti Gm1 danne et antigen-antistoffkompleks, og vil bli konsumert og derfor nøytralisert. Han vil ikke kunne handle på GRS, og reaksjonen vil være negativ. Vi vil konkludere med at serum X vårt er fra gruppe Gm1, fordi agglutinasjonsreaksjonen vår er blitt hemmet.
Hvis serumet vårt X er Gm-1, vil det ikke nøytralisere anti-globulinet vårt, som da vil være i stand til å binde seg til anti-D festet på GRS, og føre til at det klumper seg. Se uregelmessige antistoffer og zeta-potensial .
Denne agglutinasjonsinhiberingsteknikken er en veldig sensitiv teknikk, et serum fortynnet til 1/100, eller enda mer, kan hemme reaksjonen og tillot før molekylærbiologi å fremheve den menneskelige opprinnelsen (eller ape-lignende, vi er fettere) til en blodflekk.
Ditto for anti-Gm2, Gm17, Gm4, Gm ... eller anti-Km1 ... som gjør det mulig å bestemme serumgruppene av immunglobuliner
Prinsippet er det samme for Am-systemet med klasse A-immunglobuliner (IgA), enten spesifikt for et erytrocytantigen eller passivt festet på blodcellen.
Dermed tillater blodplate-Coombs-testen, eller Dixon-testen, takket være et markert antiglobulin å demonstrere sensibilisering av blodplater av et antistoff, enten det er idiopatisk trombocytopen purpura , ITP eller nyfødt trombocytopeni ved føtomateriell inkompatibilitet .
Antiglobulinet kan merkes med fluorokrom , det tillater deretter ved immunfluorescenssteknikk demonstrasjon av antiparasittantistoffer, toksoplasma eller plasmodium spesielt. Merket med et enzym er det da en teknikk for immun-enzymologi som tillater påvisning av antivirusantistoffer hvis spesifikke antigener er fiksert på en plaststøtte (perler eller kopper), for eksempel anti-hepatitt. Merket med radioaktivt jod , faller det innenfor omfanget av radioimmunologi .