pUC19 er et plasmid utviklet av Yanisch-Perron, Vieira og Messing, ved University of California . Navnet på plasmidet refererer dessuten til dette universitetet (UC, for "University of California", p for "Plasmid). Dette plasmidet, med en lengde på 2686 bp, er et sirkulært, dobbeltstrenget plasmid. PUC19 er det av de mest brukte kloningsvektorene, ettersom de rekombinante klonene lett kan identifiseres, via forskjellen i farge på de forskjellige koloniene i et bestemt kulturmedium. Merk: pUC19 ligner pUC18, forskjellen er på nivået til MCS-regionen.
pUC19 har et gen for resistens mot ampicillin amp R , så vel som det N-terminale fragmentet av et gen som koder for β-galaktosidase ( lac Z ) fra E. coli . MCS- regionen er funnet i midten av lac Z ' genfragmentet (kodoner 6–7 for nevnte gen er erstattet av MCS), en region som inneholder mange restriksjonsseter .
Ori- setet (eller replikasjonsopprinnelsen) er avledet fra vektoren pMB1.
Når innsettingen av genet av interesse i plasmidet, og den bakterielle transformasjonen som er gjort, er det veldig enkelt å skille bakteriene som er transformert fra de andre:
- Bare de som har plasmidet, vil være i stand til å danne kolonier i nærvær av ampicillin (tilstedeværelse av amp R- resistensgenet i plasmidet).
- Bakterier som inneholder det rekombinante plasmidet (med det fremmede genet på MCS-nivå) vil danne hvite kolonier, mens de andre, ikke-rekombinante, blå koloniene. Dette er den mest bemerkelsesverdige interessen til pUC19-plasmidet.
Lac Z ' fragmentet , hvis transkripsjon kan induseres av IPTG , er i stand til intraallel komplementering med den mangelfulle formen av β-galactosidase kodet av kromosomet til vertsbakterien (mutasjon (lacZ) M15, noe som resulterer i en mangel i alfa peptid). I nærvær av IPTG i dyrkningsmediet syntetiserer bakterien de to fragmentene av enzymet, alfa og beta, som tillater hydrolyse av X-gal (5-brom-4-klor-3-indolyl-beta-D-galaktopyranosid ). Denne hydrolysen er opprinnelsen til den blå fargen på koloniene.
Innsettingen av en fremmed sekvens på nivået av MCS, lokalisert i fragmentet av LacZ- genet '' resulterer i en inaktivering av nevnte gen, noe som gjør alfakomplementering umulig. Således vil bakteriene som har de rekombinante plasmidene på MCS-nivå ikke være i stand til å hydrolysere X-Gal, og vil derfor danne hvite kolonier, som lett skiller seg fra de ikke-rekombinante, blå koloniene.
Dyrkningsmediet bør derfor inneholde ampicillin , IPTG og X-gal , blant andre vanlige komponenter.